细胞死活检测试剂盒 (Calcein AM /PI)

Calcein-AM 4mM 50uL in DMSO; Unit Size #500 assays ·PI (2mM) 150uL in water

将 Calcein-AM 储备液和 PI 储备液平衡到室温。

分别加 2.5 μl Calcein-AM 原液和 12.5 μl PI 原液至 5 mL PBS（pH=7.4）中配制成染色工作液。染色工作液中 Calcein-AM 的浓度为 2 μmol/L，PI 的浓度约为 5 μmol/L。

染色 HeLa 细胞等贴壁细胞时，先用 Trypsin-EDTA 等消化细胞，制备成细胞悬液。

将细胞悬液离心 3 分钟（1,000 rpm）。

去除上清液，加入 PBS 缓冲液，细胞数量调整至 10⁵-10⁶ 个/ml。再用移液器充分混匀。

由于培养基中的血清等含有酯酶，Calcein-AM 遇水会分解，会导致空白上升，所以需要离心数次，用 PBS 洗涤数次直到完全洗净。

将 200 μl 细胞悬液移至小试管中，加入 100 μl 染色工作液，在 37°C下孵育 15 分钟。

在盖玻片上滴加适量的染色的细胞溶液。

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Cell staining with Double Staining Hela cell, incubated with assay solution for 15 min. A) viable cell; B) dead cell

在荧光显微镜下，先用 490 ± 10 nm 波长激发，观察黄绿色的活细胞，还可以同时观察到红色的死细胞，然后用 545 nm 波长激发，能够看到红色的死细胞。

通过在 0.1%皂苷或 0.1-0.5%毛地黄皂苷中孵育 10 分钟或通过在 70%乙醇中孵育 30 分钟制备死细胞。

用 0.1-10 μM PI 溶液对死细胞染色，以便找到仅对细胞核染色而不对细胞质染色的 PI 浓度。

用 0.1-10 μM Calcein-AM 溶液对死细胞染色，以便找到不对细胞质染色的 Calcein-AM 浓度。接着用该浓度的 Calcein-AM 对活细胞染色以检验活细胞可否被染色。

Calcein-AM 的 ester 部位遇到湿气会分解，使用后请在-20°C下密闭冷冻保存，防止水分进入。Calcein-AM 储备液用缓冲液或培养基等稀释时尽量现配现用。

使用时一定要带手套、眼罩、口罩。万一接触到皮肤的话，迅速使用大量水清洗。

本产品仅用于研发，操作时必须戴口罩/手套/实验服和其它生化实验室防护措施。